凝膠乾燥的步驟:
1、確保凝膠染色至少1小時。雖然蛋白質帶在染色幾分鐘後就會顯現,但染色過程通常在1小時培養後完成。根
據你使用的凝膠類 型,可能需要更長的反應時間。在完成染色過程之前進一步加工凝膠可能導致蛋白質的
脫色和靈敏度降低。如果發生這種情況,只 需在染色液中進行隔夜反應,即可保留凝膠。
2、將凝膠浸入大約100毫升的超純水中,溫度為70°C(在微波爐中加熱30到60°C)。在輕輕搖晃的同時至少反
應1小時。可加 入選擇性吸附紙或紙巾。凝膠可以在水中沁浸置隔夜。
3、在”凝膠乾燥溶液”(如4%甘油,20%乙醇在水中)中反應凝膠2分鐘。能凝膠在酒精溶液中可能使考馬斯亮
藍被溶出,因此避免反應時間超過5分鐘。
4、最後凝膠可以封入濕潤的玻璃紙膜之間乾燥了。
用於質譜(MS)分析的處理步驟:
1、切除染色的目標蛋白帶並轉移到一個乾淨的EP管。
2、加入1毫升30%乙醇或30%丙酮或30%乙酸(注意:乙酸可能導致N-端的乙醯化)。
3、孵化20min(在60°C–70°C反應,以提高脫色效率)。
4、至少三次重複第2和第3步,或直到凝膠清晰。
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